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细胞培养中无菌操作技术
  • 发布日期:2018-06-26      浏览次数:618
    • 细胞培养中的无菌技术:

      1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株的操作。

      2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌区域,勿在边缘的非无菌区域操作。

      3. 小心取用无菌的实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口,亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

      4. 工作人员应注意自身的安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染的细胞株应特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 的产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头的伤害等。

      5. 定期检测下列项目:

      5。1。 CO2 钢瓶的CO2 压力

      5.2. CO2 培养箱的CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。

      5。3。 无菌操作台内的airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

      6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水。

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