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戴安液相色谱柱需要注意的地方
  • 发布日期:2018-09-25      浏览次数:553
    •    戴安液相色谱柱需要注意的地方
         的使用和维护十分重要,液相色谱柱使用是否得当,直接影响柱子的寿命,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
         戴安液相色谱柱的正确使用:(1)柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度,必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。(2)如果仪器用来做常规分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常 规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱子的寿命。(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动,温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况,柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因 此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
         戴安液相色谱柱应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然,如使用柱温控制装置时,应注意在通人流动相后才能升温,一般说来戴安液相色谱柱不能反冲,只有生 产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效,选择使用适宜的流动相,以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使 流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
         避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换,经常用强溶剂冲洗戴 安液相色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50-75mL,保存戴安液相色谱柱时应将柱内充 满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置或更长时间。
         戴安液相色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷, 死体积增大,在完成分离分析工作之后,不应立即停机,需及时对色谱分析系统进行冲洗,一般0.5h以上,以除去色谱柱内的杂质。
         由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞戴安液相色谱柱两端的筛板,因此在进行色谱分离前,应保证样品和所用的流动相具有较高的洁净度。样品在进样前应对其进行简单的针筒过滤;流动相的纯度至少应该 达到分析纯,推荐使用色谱纯的试剂。在对样品进行分离前必须对流动相样品的pH值进行测试,确保流动相的pH值应在色谱柱允许范围内,不至于造成基质的流失和塌陷。当必须要在pH值适用范围的边界(特别是pH值 在8.0~10.0时)条件下使用液相色谱柱时,每次使用结束后应立即用适合于戴安液相色谱柱保存并与所使用的流动相互溶的溶剂淋洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
       
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